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      食用油中【膽固醇】的高效液相凝膠滲透色譜法

      【膽固醇檢測】


      目前,有關食品中膽固醇的測定方法主要有氣相色譜法,高效液相色譜法,比色法。這些方法都可以完成膽固醇的檢測,但樣品基質復雜,目標物含量低導致分析結果不理想,而采用凝膠滲透色譜法(GPC)對樣品進行前處理,可以有效解決上述問題。

      凝膠滲透色譜法采用惰性多孔材料為固定相,利用空間排阻效應將分子大小不同的物質分離,達到制備純化的目的。本文采用全自動凝膠凈化系統,提取目標物膽固醇,用高效液相色譜儀進行測定,從而建立一個簡單,快捷,準確的食用油中膽固醇的測定方法。


      【試劑】


      1.膽固醇標品(99%)

      2.甲醇(HPLC)

      3.乙酸乙酯(分析純)

      4.環己烷(分析純)

      5.石油醚(分析純)

      6.水(超純水)


      【儀器設備】


      1.SGPCS-凝膠凈化系統

      2.凝膠滲透色譜柱

      3.LC10高效液相色譜儀(等度)

      4.旋轉蒸發儀


      【含量測定】


      標準溶液制備

      準確稱取膽固醇標準品0.05g,用無水乙醇溶解并定容至 50ml作為標準儲備液放置0~4℃冰箱中備用。

      膽固醇標準溶液:分別吸取標準儲備液(1.0mg/ml)25ul、50ul、100ul、500ul、2000ul,用無水乙醇定容至10ml,現配現用。


      試樣的制備

      分別稱取0.5g植物油和0.5g鮮奶,用等體積混合的環己烷和乙酸乙酯混合溶劑定容至5ml,供后續分離凈化使用。抽取試樣注入凝膠凈化系統,流動相:等體積混合的環己烷和乙酸乙酯溶液,流速:5ml/min,收集7.5-16.5min餾分于試劑瓶中,然后移至旋轉蒸發儀中蒸發至干,加入5ml乙醇溶解,供HPLC檢測用。


      【色譜條件】


      色譜柱:C18  250mm*4.6mm  粒度5um

      流動相:乙醇

      流速:1.0ml/min

      紫外檢測器波長:208nm


      【譜圖】


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